Instrucciones para el laboratorio de biología molecular:

 

 

 

Recetas:

 

 

2 microtubos (1 gramo) de agarosa más 100 ml de TBE 1X.  Mezclar en erlenmeyer LIMPIO y poner en hot plate.  USAR GUANTE DE CALOR.  Cotejar de vez en cuando y agitar girando mezcla.  Cuando empiece a burbujear y aclare, agite constantemente hasta que hierva y se vean las burbujas en la siperficie.  Saque de hot plate y deje enfriar hasta que lo pueda coger sin quemarse.  Vertir en bandeja empezando en una esquina, ponga peinilla y rompa burbujas grandes.  Deje que solidifique.

 

 

 

Si se usa TBE 20X, para preparar 100 ml: echar en probeta 5 ml de TBE 20X y echar agua destilada hasta llegar a 100 ml.

 

Si se usa TBE 10X: 10 ml de TBE 10X y echar agua destilada hasta llegar a 100 ml.

 

 

El DNA se prepara añadiendo 100 microlitros de agua destilada y dejando a temp ambiente por 5 minutos y agitar luego.  Colocar en hielo o nevera luego mientras se usa.

 

Para restricciones:  2 microlitros de DNA y 18 de agua destilada (con la punta de micropipeta, agitar) y colocar a 37° C por 20-30 minutos.  LA TEMPERATURA ES CRITICA, no dejen que suba!!!  Luego pónga tubos en hielo mientras se preparan muestras.

 

 

DNA sin cortar:

2 microlitros de DNA

9 de agua destilada

2 de loading dye

 

Para DNA cortado (restricciones):

10 microlitros de digestión

2 de loading dye

 

 

Ponga un papel blanco debajo de la cámara (le ayudará a ver por donde van las bandas). Ponga bandeja en la cámara, de manera que las fosas queden en el lado negarivo (negro), asegúrese de que el buffer cubra el gel.  Quite CON CUIDADO la peinilla.  Añada muestras a las fosas. NO MUEVA CAMARA!!!! Ponga tapa y prenda voltímetro.  Se correra a 80 voltios (asegúrese que este leyendo en voltios y NO miliamperios).  Coteje que vea burbujas formándose en el buffer y que NO se esté calentando.  Coteje el voltaje para que no suba y ajuste de ser necesario.   Apague luego de 10 minutos y observe por donde va el loading dye corriendo.  Deje que corra el gel hasta llegar aprox. A media pulgada del extremo positivo.

 

 

 

 

 

 

Poner en bandeja y cubrir con tinte.  NO BOTE EL TINTE QUE NO TENEMOS MUCHO.  Dejar por media hora, agitar de vez en cuando.  Sacar gel (usen guantes!!!) y poner en agua a lavar hasta que destiña bastante.  Ver en iluminador.